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反相高效液相色谱法快速测定长春花中4种生物碱

摘要：研发周期长采用反相高效液相色谱法同时分离测定4种长春花吲哚类生物碱。以水：二乙胺=986：14，用磷酸调节pH=7.2(溶液A)，甲醇：即从结果导入到进程优化乙腈：4：1(溶液B)，380 ml A和620 ml B混合作为流动相，流速2 ml／min，进样量10μL，220 nm下检测，以恒流洗脱方式在25 min内分离了长春碱等4种成分。同时还研究了流动相组成、pH值等对分离效果的影响。对实际样品分析，取得了较好结果。

关键词：反相高效液相色谱，吲哚类生物碱

1 引 言

长春碱(Vinblastine)、长春新碱(Vincristine)、长春质碱(Catharanthine)、文多灵(Vindoline)是夹竹桃科植物长春花(Catharanthus roseus L．G．Don)中所含有的4种重要的吲哚类生物碱。从2010年的5%目前长春碱类生物碱主要还是从长春花植物中提取，建立长春花中这4种生物碱的快速检测对长春花GAP种植和建立质量评价体系具有重要意义。已经报道的长春碱类生物碱的含量测定方法有薄层扫描法 、高效液相色谱法 及放射性免疫测定法 等。但对4种生物碱同时测定，国内尚未见报道。本研究在以往文献的基础上，建立了温度升高快速测定4种吲哚类生物碱的反相高效液相色谱方法，在实际样品的分析中取得了满意的结果。

2 实验部分

2．1 仪器与试剂

JASCO高效液相色谱仪(13本JASCO公司)，1580泵，1575型紫外检测器，Version 6.1色谱工作站。长春碱、长春新碱(纯度≥99％ ，Sigma公司)，长春质碱、文多灵(纯度 195％ ，浙江海正药业股份有限公司)；长春花样品采自海南省海口市；乙腈、甲醇均为色谱纯；磷酸、二乙胺为分析纯；水为二次蒸馏水。

2．2 对照品与样品配制

精确称取适量长春碱、长春新碱、长春质碱、文多灵对照品，用5 mL甲醇溶解并定溶于25 mL容量瓶，摇匀，所配制的浓度分别为0.5、0.5、0.5和1.0 g／L。取长春花全株粉末10 g，室温下分别用60、40、20 mL甲醇超声提取40、30、20 min，过滤，合并提取液，50℃减压蒸发，经0.45μm的微孔滤膜过滤，滤液定容至50 mL。所有样品保存于4℃冰箱中备用。

2．3 色谱条件

色谱柱：DiamonsilTM Cl8 ODS(250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相为水：二乙胺=986：14，用磷酸调节pH=7.2(溶液A)；甲醇：乙腈=4：1(溶液B)，380 mL A和620 mL B混合作为流动相；流速为2 mL／min；进样量：10 L；柱温：23℃ ；检测波长：220 nm。